La série se place dans la fin du XX^e siècle d'un univers fantastique peuplé de vampires et de démons. Une jeune fille, seule élue à chaque génération, la Tueuse (the Slayer, en version originale), dotée de qualités athlétiques fantastiques, est chargée de combattre ces vampires, pour que ses contemporains puissent vivre en paix. La série suit les aventures de la Tueuse en titre, Buffy, dans la petite ville de Sunnydale en Californie, qui se trouve être un point de convergence des énergies maléfiques (il s'y trouve une "bouche de l'Enfer"), et donc un terrain d'aventures inépuisable pour une Tueuse.

Entraînée par son Observateur, Rupert Giles, et aidée par ses amis (le scooby gang) particulièrement Willow et Alex (Xander en version originale), Buffy tente d'assumer sa mission de Tueuse, sa frivolité d'adolescente devant petit à petit céder devant une attitude plus responsable, tout en menant sa vie de lycéenne puis d'étudiante, et en faisant bonne figure en famille.